Métodos de Coloração Bacteriana

Coloração de Gram (diferencial)
Processo de coloração e as bases quimico-estruturais dos resultados.
A forma mais comum de classificação de bactérias é através do método de gram, podendo ser: coloração de GRAM positiva ( GRAM + )
ou GRAM negativa (GRAM -).
processo da coloração de GRAM:

a . violeta de Ginciana (mínimo de 1 min)

b . lugol (Iodo + Iodeto K) - mínimo 1 min

c . agente diferenciador: álcool + acetona

Em algumas células o agente diferenciador não consegue penetrar: a célula continua azul. (B)

Em algumas células o agente diferenciador consegue penetrar retirando a coloração azul.(A)

d . safranina ou fuccina diluída: contracoloração . Bactérias A agora se coram em vermelho / rosa e com as bactérias B não acontece nada, continuando azuis.

Desta forma, podemos resumir o resultado da coloração de GRAM em duas formas:

• bactérias GRAM positivas: ficam azuis, pois não permitem a entrada do agente diferenciador.

• bactérias GRAM negativas: ficam vermelhas, pois permitem entrada do agente diferenciador.

Nota - Parede celular: formada por camadas múltiplas externamente à membrana plasmática. Há uma camada mais interna que é composta por peptideoglicana envolta por uma camada mais externa (varia espessura e composição química). A peptideoglicana confere resistência a meios de baixa pressão osmótica como a água, sendo responsável pelo suporte estrutural e também mantém a forma característica da bactéria. A peptideoglicana é um açúcar com grupos amina sendo uma esrtutura estável.

Diferenças entre as paredes das bactérias GRAM positivas e GRAM negativas:

• GRAM positivas:

- camada de peptideoglicana é mais espessa e algumas também possuem uma camada de ácido teicóico externa à camada de peptideoglicana.

Nota - ácido teicóico: é uma estrutura anti-gênica importante, reconhecida pelo sistema imune (induz formação de anticorpos espécie - específicos). São encontrados na camada externa da parede celular de GRAM +. Alguns polímeros de ácido teicóico penetram através da camada de peptideoglicana, ligando-se covalentemente aos lipídeos da membrana citoplasmática, sendo agora denominada de ácido lipoteicóico, enquanto outros se ligam ao ácido murâmico da peptideoglicana.

• GRAM negativs:

- camada externa composta por lipopolissacarídeos, lipopoliproteínas e fosfolipídeos. Há o espaço periplasmático - entre membrana citoplasmática e camada de peptideoglicana - que em alguma espécies contém B - lactamases (degrada penicilina ) e B - lactâmicas.

- tem parede mais fina, porém mais complexa.

- possui endotoxinas (lipopolissacarídeos).

- deixa entrar agente diferenciador porque tem lipídeos. GRAM + não.

considerações importantes

• Algumas bactérias são pleomórficas em relação à coloração GRAM, logo se coram irregularmente.

• A lisozima ataca paredes de bactérias GRAM positivas, havendo uma forma involutiva. A lisozima se encontra nas lágrimas, suor e saliva e consegue romper o esqueleto da peptideoglicana, permitindo que exista uma resistência natural do hospedeiro à infecção bacteriana.

• Estreptococos produzem autolisinas que ficam na sua parede, permitindo a entrada do agente diferenciador. Com isso, a bactéria apresenta coloração GRAM negativa devido à forma de involução.

• Propriedade tintorial: é qualificar a bactéria em GRAM positiva ou GRAM negativa.

• Bactérias GRAM positivas podem se tornar GRAM negativas ao sofrer uma modificação em sua membrana.

• Bactérias tratadas com lisozima perdem sua parede, mas se forem tratadas em um meio à mesma pressão osmótica que seu interior ficam arredondadas - esferoplastos e os protoplastos.

• Bactérias GRAM negativas não pode se tornar GRAM positivas.

• Forma L: são as GRAM negativas ou GRAM positivas que perdem suas paredes.

• Bactérias GRAM positivas são mais susceptíveis à penicilina G do que as GRAM negativas.

Nota: As proteínas porinas têm importante função na regulação do transporte de pequenas moléculas hidrofílicas para o interior da célula. Formam trímeros, funcionando como um canal inespecífico.